1) Щоб відновити ДНК, використовуйте чисті рукавички та виріжте позначену колом ділянку, яка містить висушену плазмідну ДНК. 2) За допомогою чистих щипців вставте фільтрувальний папір у мікроцентрифужну пробірку на 1,5 мл. Додайте 100 мкл буфера TE (або води для молекулярної біології), постукайте по пробірці, щоб перемішати, та інкубуйте при кімнатній температурі протягом 10 хвилин.
Розчинити в 20-50 мкл буфера TE, pH 8,0. a. Гранули ДНК погано розчиняються в буферах з високим вмістом солі. Щоб полегшити ресуспендування, концентрацію ДНК у кінцевому розчині слід підтримувати на рівні <1 мг/мл.
Відновлення плазміди Стерильно виріжте гурток фільтрувального паперу. Додайте 50 мкл 10 мМ Tris, рН 7,6, перемішайте і дайте регідратуватися протягом 5 хв. Після короткого центрифугування надосадову рідину можна використовувати для трансформації компетентних бактерій. Використовуйте приблизно 25 мкл супернатанту для трансформації 100 мкл компетентних клітин.
Існує п’ять основних етапів екстракції ДНК, узгоджених для всіх можливих хімічних процесів очищення ДНК: 1) руйнування клітинної структури для створення лізату, 2) відділення розчинної ДНК від залишків клітини та іншого нерозчинного матеріалу, 3) зв’язування ДНК, що представляє інтерес для матриці очищення, 4) …
Коментар обговорення
- Метод екстракції ДНК на основі хроматографії. …
- Метод градієнтного центрифугування EtBr-CsCl. …
- Лужна екстракція. …
- Кремнеземні матриці. …
- Метод висолювання. …
- Екстракція цетилтриметиламоній броміду (CTAB). …
- Фенол-хлороформний метод. …
- SDS-протеїназа К.
Осадження етанолу часто використовується для отримання молекул ДНК, екструдованих з клітин. Розчин етанолу концентрацією близько 70 % (об’єм/об’єм) зазвичай використовується для індукції преципітації ДНК.