Розведіть одну частину грунтовки, додавши 9 частин води, щоб створити концентрацію робочої маси 10 пмоль/мкл (1:10). Наприклад, ми розбавили 50 мкл розчину, додавши 450 мкл ddH2O, утворивши 500 мкл 10 пмоль/мкл робочого розчину.
Праймери – це короткі послідовності ДНК, які використовуються для визначення ділянки, ампліфікованої під час ПЛР. Готові до використання ґрунтувальні суміші містить усі праймери для конкретного проекту, попередньо змішані та розбавлені до зручної для використання концентрації.
Дистильована вода підходить. Використання буфера 1x TE набагато краще, ніж вода, для розведення та збереження праймерів, зондів та інших олігонуклеонів. Буфер TE запобігає деградації праймерів через багаторазове заморожування та відтавання, чого не може зробити вода.
0,1–1 мкМ Під час встановлення ПЛР до реакції додають праймери в діапазоні 0,1–1 мкМ. Для праймерів з виродженими основами або тих, що використовуються в довгій ПЛР, концентрації праймерів 0,3–1 мкМ часто є сприятливими.
Ґрунтовка складається з двох упаковок: одна є базовою, 4-літрова упаковка, а інша називається затверджувачем, 1-літрова упаковка. 3. Змішайте потрібну кількість основи та затверджувача (пропорція змішування: 4: 1 Основа до Затверджувача за об’ємом).